雌性九间菠萝鱼性成熟的时间比较早，在5月龄左右就开始产卵了，而雄性九间菠萝鱼在6月龄后才达到性成熟。雌鱼发情的时候会出现身体颤动的现象，同时体色也会发生变化。
在繁殖期，雄鱼的体色通常要比雌鱼的体色艳丽，并且体表还会出现红色斑点和菠萝纹。雌鱼在繁殖期可以产卵300粒以上，配对成功后2~3天就能孵出鱼仔。
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